AtomTrace是歐洲工程技術(shù)中心（CEITEC）的衍生公司，公司成員均為布爾諾大學(xué)激光光譜與化學(xué)分析實(shí)驗(yàn)室的科研人員。實(shí)驗(yàn)室起始于1997年，在LIBS應(yīng)用技術(shù)研發(fā)領(lǐng)域具有近20年的深厚經(jīng)驗(yàn)，其研制生產(chǎn)的Sci-Trace LIBS元素分析系統(tǒng)獲得捷克國家2016年年度合作獎(jiǎng)。而在此之前，AtomTrace團(tuán)隊(duì)曾在歐洲LIBS元素分析大賽中斬獲優(yōu)異成績！

使用Sci-Trace，便意味著得到了的專業(yè)團(tuán)隊(duì)技術(shù)支持和實(shí)驗(yàn)室合作。

LIBS技術(shù)相較于其它元素分析方法，有其*和不可替代的優(yōu)勢

§ 較XRF技術(shù)無法檢測輕元素的遺憾而言，LIBS可以檢測所有元素;

§ 較ICP-MS等傳統(tǒng)方法，樣品無須預(yù)處理, 固、液、氣態(tài)樣品都可直接檢測，實(shí)時(shí)分析;

§ 測量速度可達(dá)1秒鐘20次，單次測量即可同時(shí)定性、半定量檢測元素周期表中所有元素;

    不同的營養(yǎng)及礦物質(zhì)含量，極大的影響植物的生長和代謝對于環(huán)境的響應(yīng)。元素測量一直采用ICP-OES或者AAS的傳統(tǒng)方法，缺點(diǎn)是樣品預(yù)處理復(fù)雜，容易引入新的雜質(zhì)并造成測量誤差。但關(guān)鍵的是，無法得到元素分布的空間信息。而如若分布模式不同，即使含量相近，對植物生理狀態(tài)的影響也差異巨大。而LIBS技術(shù)可以在植物活體狀態(tài)下無須預(yù)處理進(jìn)行元素mapping掃描快速分析，恰恰彌補(bǔ)了這一缺憾。LA-ICP-MS技術(shù)同也可進(jìn)行元素分布掃描，但仍存很多問題有待克服：激光燒蝕樣品經(jīng)載氣運(yùn)送至ICP，會(huì)在運(yùn)送管中有顆粒物殘留； ICP中大顆粒氣化不*；記憶效應(yīng)（前次測量對下次測量結(jié)果的影響）；霧化室及運(yùn)送管中的死角對信號強(qiáng)度和持續(xù)時(shí)間的影響；必須在同一位置多次測量才能獲得足夠強(qiáng)的信號等等。因此對于植物中元素分布的測量，LIBS被認(rèn)為是有前景的測量技術(shù)。

    ?AtomTrace研究團(tuán)隊(duì)很早就關(guān)注到LIBS技術(shù)在植物科學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用。2006年，Jozef Kaiser博士（AtomTrace CEO、布爾諾科技大學(xué)光譜技術(shù)實(shí)驗(yàn)室主任）等即在European Physical Journal上發(fā)表了“Femtosecond laser spectrochemical analysis of plant samples”，應(yīng)用libs技術(shù)對山茱萸整個(gè)葉片中的Fe、Mn元素進(jìn)行分布mapping研究。當(dāng)時(shí)在該實(shí)驗(yàn)中，F(xiàn)e的LOD（檢測限）已經(jīng)做到5ppm。

    AtomTrace團(tuán)隊(duì)?wèi)?yīng)用LIBS技術(shù)在植物元素分析領(lǐng)域一直在孜孜不倦的探索，優(yōu)化算法、開發(fā)軟件、優(yōu)化儀器-----例如用真空反應(yīng)室、雙激發(fā)技術(shù)等提高mapping分辨率，開發(fā)AtomAnalyzer光譜數(shù)據(jù)分析軟件將計(jì)算速度提高10倍，研制紫外真空模塊檢測0-300nm紫外光區(qū)域譜線等。測試對象既有活體植物，也有干枯樣品；包括植物根、莖、葉等植物各部分組織；植物種類包括旱生植物，也包括高水分含量的水生植物；定性定量測量的元素涉及對植物有重要影響的Al、Ca、C、Mg、P、Si、Sr、Zn、B、Cu、Fe、Mn、Pb、K、S、Na、Cl、H、N、Ni、Ba、Ag等等。并發(fā)表植物L(fēng)IBS分析領(lǐng)域高影響因子文章如下：

• Pavlína M, Karel N, Pavel P, Jakub K, P?emysl L, Helena Z. G, Kaiser J, Comparative investigation of toxicity and bioaccumulation of Cd-based quantum dots and Cd salt in freshwater plant Lemna minor L. [J], Ecotoxicology and Environmental Safety, 147 (2018) 334–341.
• Krajcarová L, Novotný K, Kummerová M, J. Dubová J, Gloser V, Kaiser J. Mapping of the spatial distribution of silver nanoparticles in root tissues of Vicia faba by laser-induced breakdown spectroscopy (LIBS) [J], Talanta 173 (2017) 28–35.
• Lucie K, Novotny K, Petr B, Ivo P, Petra K, Vojtech A, Madhavi Z. Rene K, Kaiser J, Copper Transport and Accumulation in Spruce Stems Revealed by Laser-Induced Breakdown Spectroscopy, [J]. Electrochemical Science, 8 (2013) 4485 – 4504.
• Zitka O, Krystofova O, Hynek D, et al. Metal Transporters in Plants [M]. Heavy Metal Stress in Plants. 2013: 19-41.
• Kaiser J, Novotny K, Martin M Z, et al. Trace elemental analysis by laser-induced breakdown spectroscopy—Biological applications [J]. Surface Science Reports, 2012, 67 (11–12): 233-243.
• Michaela G, Jozef K, Karel N, et al. Utilization of laser-assisted analytical methods for monitoring of lead and nutrition elements distribution in fresh and dried Capsicum annuum I. leaves [J]. Microscopy Research and Technique, 2011, 74 (9): 845-852.
• Diopan V, Shestivska V, Zitka O, et al. Determination of Plant Thiols by Liquid Chromatography Coupled with Coulometric and Amperometric Detection in Lettuce Treated by Lead (II) Ions [J]. Electroanalysis, 2010, 22 (11): 1248-1259.
• Kaiser J, Galiova M, Novotny K, et al. Utilization of the Laser Induced Plasma Spectroscopy for monitoring of the metal accumulation in plant tissues with high spatial resolution [J]. Networking IEEE/ACM Transactions on, 2010, 20 (4): 1096-1111.
• Kaiser J, Galiova M, Novotny K, et al. Mapping of lead, magnesium and copper accumulation in plant tissues by laser-induced breakdown spectroscopy and laser-ablation inductively coupled plasma mass spectrometry [J]. Spectrochimica Acta Part B Atomic Spectroscopy, 2009, 64 (1): 67-73.
• Krystofova O, Shestivska V, Galiova M, et al. Sunflower Plants as Bioindicators of Environmental Pollution with Lead (II) Ions [J]. Sensors, 2009, 9 (7): 5040-5058.
• Kaiser J, Galiova M, Novotny K, et al. Mapping of the heavy-metal pollutants in plant tissues by Laser-Induced Breakdown Spectroscopy [C] Spectrochimica Acta Part B 64 (2009) 67–73.
• Galiova M, Kaiser J, Novotny K, et al. Investigation of heavy-metal accumulation in selected plant samples using laser induced breakdown spectroscopy and laser ablation inductively coupled plasma mass spectrometry [J]. Applied Physics A, 2008, 93 (4): 917-922.
• Sona K, Pavel R, Olga K, et al. Multi-instrumental analysis of tissues of sunflower plants treated with silver(I) ions – plants as bioindicators of environmental pollution [J]. Sensors, 2008, 8 (1): 445-463.
• Stejskal K, Mendelova Z, et al., Study of effects of lead ions on sugar beet [J]. Listy Cukrovarnicke A Reparske, 2008, 124 (4): 116-119.
• Galiova M, Kaiser J, Novotny K, et al. Utilization of laser induced breakdown spectroscopy for investigation of the metal accumulation in vegetal tissues [J]. Spectrochimica Acta Part B Atomic Spectroscopy, 2007, 62 (12): 1597-1605.
• Kaiser J, Samek O, Reale L, et al. Monitoring of the heavy-metal hyperaccumulation in vegetal tissues by X-ray radiography and by femto-second laser induced breakdown spectroscopy [J]. Microscopy Research and Technique, 2007, 70 (70): 147-153.

AtomTrace團(tuán)隊(duì)?wèi)?yīng)用LIBS技術(shù)進(jìn)行植物中金屬元素分布的研究案例

研究案例一

浮萍（Lemna minor L.）是金屬元素環(huán)境污染的指示物種，也是常被用于金屬毒害和富集作用研究的模式生物。本案例中，AtomTrace團(tuán)隊(duì)?wèi)?yīng)用LIBS技術(shù)對浮萍做元素分布mapping，比較研究Cd鹽和QDs中的Cd元素在浮萍中的富集模式；并應(yīng)用傳統(tǒng)ICP-OES技術(shù)對不同含Cd化合物在浮萍中的含量和富集進(jìn)行測量；同時(shí)應(yīng)用TEM方法探究QDs的富集位置---浮萍表面、細(xì)胞內(nèi)部、還是植物組織內(nèi)。 

注：Cd離子在2015年275種重要有害物質(zhì)清單中*7。含Cd量子點(diǎn)（QDs）通常由直徑3-6 nm 的CdS、CdSe、PbSe及CdTe和其它一些金屬元素構(gòu)成，其外覆有有機(jī)聚合物。由于其染料效果優(yōu)于其它生物染料所以大量排放至水域中并在水中釋放出Cd離子，所以研究Cd量子點(diǎn)對生物的毒害作用有重要的應(yīng)用意義。

使用雙激發(fā)LIBS技術(shù)研究Cd元素在浮萍小葉中的分布情況

實(shí)驗(yàn)方法：

§ 浮萍葉片分別在含鎘化合物CdCl₂、MPA-QDs 及 GSH-QDs 溶液（該三種溶液濃度皆分別設(shè)為三個(gè)梯度：0.1、 1和 10 mg/L）中處理。將小葉貼于載玻片上制作樣品； 

§ LIBS測量采用正交雙激發(fā)。一次激發(fā)激光波長266nm，脈沖能量10mJ；二次激發(fā)激光波長1064nm，脈沖能量1064mJ；兩次激發(fā)激光脈沖長度均為5nm。每次測量均將葉片擊穿。

§ 掃描測量分辨率：200 μm；

§ Cd檢測主譜線：508.58 nm；

Fig. 4 Cd量子點(diǎn)及Cd鹽處理下浮萍小葉元素mapping圖像

實(shí)驗(yàn)結(jié)論：

§ CdCl₂和Cd-QDs污染，對于Cd元素在浮萍葉片表面分布的影響無區(qū)別；

§ 濃度不同，對于Cd元素在浮萍葉片表面分布的影響無區(qū)別；

§ 實(shí)驗(yàn)中三種含鎘化合物（CdCl_2、MPA-QDs、GSH-QDs）濃度升高，LIBS檢測信號皆隨之增強(qiáng)；

§ 莖結(jié)處Cd元素富集作用明顯高于其它組織

引自：Pavlína, M., Karel, N., Pavel, P., J, K., P, L., H, Z.G., Jozef, K., 2018. Comparative investigation of toxicity and bioaccumulation of Cd-based quantum dots and Cd salt in freshwater plant Lemna minor L. [J]. Ecotoxicology and Environmental Safety 147 (2018) 334–341

研究案例二

對植物組織的元素進(jìn)行LIBS mapping分析，可以通過譜線位置判別元素種類，通過譜線強(qiáng)度得到元素濃度，而元素mapping圖像可以得到元素分布、以及若干種元素的相關(guān)位置分布信息。而在同一位置連續(xù)測量，即可得到元素剖面分布的3D信息。

Fig. 5 所示實(shí)驗(yàn)研究：

Fig. 5 A：萵苣葉片上，Pb元素對Mg元素分布的影響。Mg是葉綠素的關(guān)鍵金屬，而Pb元素對葉綠素卻有更強(qiáng)的親和性，因此葉片中Pb濃度上升時(shí)，Mg濃度下降。

Fig. 5 B：Pb處理使玉米葉片中Pb濃度增加。

Fig. 5 C：植物對金屬離子毒害的抗性各不相同。如圖中所示向日葵葉片中，Pb處理對Mg元素的分布無影響。該實(shí)驗(yàn)結(jié)果與形態(tài)學(xué)分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致。

Fig. 5 D：LIBS技術(shù)也可應(yīng)用于植物其它組織中的元素分析。如圖中所示松樹枝條的雙激發(fā)LIBS測量所得的3D元素分布圖。

Fig. 5

引自：Jozef, K., Karel, N., et al., Trace elemental analysis by laser-induced breakdown spectroscopy—Biological applications. Surface Science Reports 67 (2012) 233–243

研究案例三

根部對于植物養(yǎng)分供應(yīng)、保護(hù)植物避免受到過量金屬離子的毒害方面發(fā)揮著重要作用，但是根部元素分析的難度要遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于對莖部組織，原因包括：根通常要比莖和芽細(xì)小很多；干物質(zhì)含量小很多，為樣品切割帶來很大不便；通常待分析元素相對含量較低；而柔軟多汁的樣品如何保持其結(jié)構(gòu)形狀以得到元素分布的正確結(jié)果，同樣是個(gè)難題。

AtomTrace針對上述挑戰(zhàn)，在本案例中進(jìn)行了成功的探索 --- 應(yīng)用雙激發(fā)LIBS技術(shù)對蠶豆幼苗根部納米銀顆粒（直徑為21.7±2.3 nm）進(jìn)行mapping分析，目標(biāo)是對自然狀態(tài)下的植物組織進(jìn)行元素檢測，獲得高mapping分辨率的同時(shí)確保檢測靈敏度。這同時(shí)也是整個(gè)LIBS領(lǐng)域中，對植物根部納米顆粒分布情況的初次嘗試。

LIBS雙激發(fā)技術(shù) --- 即每次采集的測量信號，都為兩次激光脈沖激發(fā)。如此可減輕燒蝕擾動(dòng)并提高mapping分辨率；同時(shí)兩次激發(fā)可增強(qiáng)信號，以獲得可重復(fù)性更高、更優(yōu)LOD（檢測限）的檢測結(jié)果。

實(shí)驗(yàn)參數(shù)：二次激發(fā)脈沖能量分別為5MJ@266nm和100MJ@1064nm，間隔為500ns；測量頻率為1次/秒；實(shí)驗(yàn)在1個(gè)大氣壓下進(jìn)行。

實(shí)驗(yàn)材料：蠶豆幼苗，分辨在AgNP溶液、Cu+和Ag+離子溶液處理7天，做40μm厚切片進(jìn)行LIBS mapping測量。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果：由以下實(shí)驗(yàn)結(jié)果可見，LIBS技術(shù)檢測速度快；即使對直徑只有2mm的幼根，也可對其橫切面中的金屬離子及金屬納米顆粒分布進(jìn)行mapping分析，檢測的度和圖像分辨率足以滿足實(shí)驗(yàn)需求。應(yīng)用雙激發(fā)技術(shù)，Mapping分辨率可達(dá)到50μm，足以區(qū)分根表皮層、皮層、中柱中的元素分布特征。

此外，7天的短時(shí)間處理即可檢測結(jié)果，說明對自然環(huán)境中、自然養(yǎng)分條件下的植物來說，LIBS 元素mapping也是元素分布檢測行之有效的實(shí)驗(yàn)方法，因此將是植物生理學(xué)和環(huán)境毒理學(xué)領(lǐng)域中的有效應(yīng)用。

Fig. 6 蠶豆幼苗根橫切進(jìn)行分辨率為50μm的單線測量后，燒蝕坑情況

Fig.7 Cu⁺溶液處理蠶豆幼苗根橫切不同分辨率下mapping結(jié)果：100μm、75μm、50μm

Fig.8 不同濃度Cu²⁺溶液【a) 100 μmol l⁻¹ Cu²⁺ ；b)50 μmol l⁻¹ Cu²⁺；c) 10μmol l⁻¹ Cu²⁺； d) 0 μmol l⁻¹ Cu²⁺】處理蠶豆幼苗根橫切mapping結(jié)果；e）樣品區(qū)特征譜線；f）Cu²⁺濃度降低，其對應(yīng)譜線強(qiáng)度也依次降低

Fig.9  Cu2+、Ag+、AgNPs處理7日后的蠶豆幼苗根部橫切的顯微圖像和元素mapping對應(yīng)結(jié)果（引自：Krajcarová L, Novotný K, Kummerová M, J. Dubová J, Gloser V, Kaiser J. Mapping of the spatial distribution of silver nanoparticles in root tissues of Vicia faba by laser-induced breakdown spectroscopy (LIBS) [J], Talanta 173 (2017) 28–35.） 

    北京易科泰生態(tài)技術(shù)有限公司是由科學(xué)家創(chuàng)建并為科學(xué)家提供科技服務(wù)的高新技術(shù)企業(yè)，是AtomTrace公司在中國（包括香港、中國臺灣地區(qū)）的代理和技術(shù)咨詢服務(wù)中心。易科泰生態(tài)技術(shù)公司在青島、西安設(shè)有分公司，在全國各地設(shè)有辦事處，北京總部設(shè)立有 EcoLab 實(shí)驗(yàn)室以提供實(shí)驗(yàn)研究合作、儀器技術(shù)培訓(xùn)等。